谷胱甘肽-S-转移酶(GST)是一种亲和标签,用GST标记真核蛋白可增强融合蛋白的溶解性。此外,带有 GST 标签的蛋白可以在细菌中高水平表达,但可能会由于蛋白聚集而形成包涵体。一般将GST标签添加到目标蛋白质的N或C末端。
虽然带有GST标签的蛋白质可以高表达并更易溶解,但标签的大尺寸会干扰下游应用中的蛋白质功能。可以从GST标签上切割蛋白质,从而减少可能的功能干扰。
要使用GST标签,应先将目标蛋白的编码区克隆到载体中,然后在大肠杆菌中表达标记的蛋白。使用诱导型启动子控制靶蛋白表达可以帮助处理对细菌细胞有毒的蛋白。细菌细胞裂解后,使用基于谷胱甘肽的填料纯化带有GST标签的蛋白质。接着利用蛋白酶将GST标签去除,进行下一步分析。